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水體中的氮通常以無機態(tài)氮和有機態(tài)氮這兩種形式 存在，其含量的總和被稱為水體的總氮。總氮是反映水 體水質和富營養(yǎng)化程度的重要指標。正常情況下，天然 水中的總氮含量不高，但由于人類活動中大量生活、農 田和工業(yè)污水的排放，天然水中的總氮含量增加，導致 水體出現富營養(yǎng)化現象，例如“赤潮”、 “水華”等現象。 因此，必須控制水體中的總氮含量。常用的是堿性過 硫酸鉀消解紫外分光光度法測定水和廢水中總氮的含 量。但該方法受比色管篩選、過硫酸鉀試劑、實驗用水、消解溫度、消解時間、冷卻時間、待測樣品的稀釋、波 長定位的準確性等多個影響因素的影響，在實際測定過 程中，常出現空白值高、測定值準確度低和重復性較差 的問題。
1 紫外分光光度法原理
測定水體中的總氮含量，是指測定水體取樣中溶解 態(tài)氮和他相關的懸浮物中氮的總和，主要有亞硝酸鹽氮、 溶解態(tài)氨、硝酸鹽氮、無機銨鹽及其大部分有機含氮化合物中的氮的總量。采用紫外分光光度法測定水質總氮， 主要是依據堿性過硫酸鉀溶液在 120~124℃環(huán)境下能把 樣品里含氮化合物轉化為硝酸鹽這一基本化學原理。紫 外分光光度法會在波長 220nm、275nm 處，分別做吸光 度 A220、A275 測定，然后根據公式 ：A =A220-2A275， 吸光度 A 校正進行計算。后利用總氮與校正吸光度 A 之間存在的正比關系，進行總氮（N）含量的計算。
2 紫外分光光度法測定水質總氮的影響因素
在紫外分光光度法測定水質總氮的實驗過程中，實 驗用水、過硫酸鉀、消解時間、實驗室環(huán)境與實驗器皿 和波長定位的準確性等因素均會對終總氮含量的結果 產生影響。 2.1 實驗用水 實驗用水是紫外分光光度法進行水質總氮測定過程 中，影響空白值的吸光度高低的重要影響因素。將不同 的水配置而成的堿性過硫酸鉀溶液的配置用作實驗用水 進行總氮測定，會對空白值吸光度值產生很大的影響。 例如，用超純水對堿性過硫酸鉀溶液進行配置而用作實 驗用水，其空白試驗吸光度值可達到 0.4 以上，而用重 蒸餾無氨水進行堿性過硫酸鉀溶液的配置，其空白試驗 吸光度值可以穩(wěn)定在小于 0.03 的范圍內，甚至有時效果 好到 0.02。因此，若要提高紫外分光光度法測定總氮的 結果度，建議采用新鮮的無氨水作為實驗用水進行 堿性過硫酸鉀溶液的配置。 2.2 過硫酸鉀 在采用紫外分光光度法測定水質總氮的實驗中，堿 性過硫酸鉀是影響測定結果的重要因素，其影響主要可 以歸因于過硫酸鉀的質量、過硫酸鉀的配置與過硫酸鉀 的存儲時間等三個方面。 過硫酸鉀試劑的純度會對空白試驗值的高低及測定 結果的準確性產生直接影響。一般純的過硫酸鉀中，其 總氮含量高不會超過 0.0045%，但不同廠家及批號的 過硫酸鉀試劑含氮量存在差異。未達標的那些試劑用于 實驗，就會導致出現空白試驗值偏高的問題。因此，若 要保證總氮測定的度，就需要采用質量好的過硫酸 鉀試劑，若試劑質量無法達到要求，則需要對其采用重 結晶法進行提純。 堿性過硫酸鉀的配置過程是總氮測定實驗中至關重 要的一個環(huán)節(jié)，一旦掌握出錯，則會影響實驗中的消解 效果，對測定結果產生影響。配置方法主要有以下兩種： 一是采取分別配置法，將過*和*分開配置， 再在室溫下進行混合 ；二是先配置*溶液，待冷 卻到室溫時再將過硫酸鉀溶解其中。堿性過硫酸鉀的配 置過程中，不僅過硫酸鉀試劑的質量十分重要，氫氧化 鈉的選擇也值得重視。實際配置中，不論哪種配置方法， 為防止過硫酸鉀在高溫下分解失效，在溶解過硫酸鉀時， 若要加速溶解過硫酸鉀，都必須要采用水溫低于 60℃的 水浴加熱法進行加熱。 過硫酸鉀在總氮測定實驗中作為氧化劑，其濃度會 影響測定結果的。因此，過硫酸鉀需要進行避光低溫保 存。根據標準方法規(guī)定，其存儲時間一般不能超過 7d， 為短于3d或現配現用，以防影響測定結果的度。 過硫酸鉀的儲存時間還會對總氮測定中的空白值產生一定的影響，若儲存時間長于 3d，空白值也會隨之增大。 2.3 消解時間 堿性過硫酸鉀在 220nm 處存在較大的吸收峰，因此 若其在消解過程中未分解*，則可能會影響樣品吸光 度的測定結果。不同的加熱時間測定的堿性過硫酸鉀產 生的吸光度也不同。標準方法規(guī)定的加熱時間為 30min， 但根據實驗，若保持消解的溫度在 120~140℃，堿性過 硫酸鉀的消解時間需要達到 50min 以上，其吸光度才會 降至到較低水平并保持穩(wěn)定。因此，紫外分光光度法測 定總氮過程中，加熱消解時間需要適當延長，以 50min 為消解時間。 2.4 實驗室環(huán)境與實驗器皿 紫外分光光度法測定水質總氮的實驗中，實驗環(huán)境 與實驗器皿的清潔度也是影響測定結果的影響因素之 一。在實驗過程中，需要嚴格避免實驗中氮的交叉污染， 不能與其他使用到銨鹽類試劑的實驗一共進行，也需要 遠離廁所，防止強揮發(fā)性的氨水蒸發(fā)入空氣重新溶解于 樣品中，導致測定結果偏高。實驗中的玻璃器皿均需要 用體積分數為 10% 的鹽酸溶液、超純水和無氨水順序進 行清洗，保證實驗器皿不被污染，影響總氮測定結果。 2.5 波長定位的準確性 紫外分光光度法測定總氮過程中，需要同時測定樣 品 220nm 和 275nm 波長處的吸光值。但在實際操作中， 使用手動調節(jié)波長的紫外分光光度儀測定總氮時，每次 需來回手動調節(jié)波長，每次調節(jié)后波長的*復位十分 困難，所以必然會在波長定位環(huán)節(jié)產生一定的人為誤差。 因此，建議采用雙波長紫外分光光度計進行不同波長處 吸光值的測定，既快速方便又能有效避免調整波長產生 的誤差。
3 結語
紫外分光光度法測定水質總氮過程中，需要把握實 驗用水、過硫酸鉀、實驗室環(huán)境和實驗器皿等每一個環(huán) 節(jié)，才能保證總氮測定結果的準確性。其中，試驗用水 需要采用新鮮重蒸餾的無氨水 ；堿性過硫酸鉀的配制過 程需要采用水浴加熱法，并盡量避免過硫酸鉀的長時間 儲存 ；消解時間延長至 50min ；實驗室環(huán)境與實驗 器皿要確保干凈，避免交叉污染 ；測定過程中，采用雙 波長紫外分光光度計測定 220nm 和 275nm 波長處的吸光 值。